GB5413.14-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中維生素B12的測定內(nèi)容是什么?百檢網(wǎng)檢測范圍廣泛，可根據(jù)客戶需求選擇合適的檢測標(biāo)準(zhǔn)及項(xiàng)目安排檢測，全國近千家合作實(shí)驗(yàn)室，CMA/CNAS資質(zhì)齊全，可就近安排寄樣檢測。今天百檢網(wǎng)就給大家簡單介紹一下GB5413.14-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中維生素B12的測定標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容。

1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中維生素B12的測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素B12的測定。

2.規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改單)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.原理

利用萊士曼氏乳酸桿菌( Lactobacillus leichmannii)對維生素B12的特異性和靈敏性,定量測定出試樣中維生素B12的含量。在測定用培養(yǎng)基中供給除維生素B1以外的所有營養(yǎng)成分,這樣微生物生長產(chǎn)生的透光率就會同標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液及未知待測溶液中維生素B12的含量相對應(yīng)。以不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的透光率相對于各濃度水平標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出試樣中維生素B12的含量。

4.試劑和材料

除非另有規(guī)定,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。

4.1 菌株:萊士曼氏乳酸桿菌( Lactobacillus leichmannii)ATCC 7830。

4.2 維生素B12( Vitamin B12或 Cyanocobalamin)標(biāo)準(zhǔn)品:分子式C63H88CON14O14P,純度≥99%。

4.3 培養(yǎng)基

4.3.1 乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基:見附錄A。

4.3.2 乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基:見附錄A。

4.3.3 維生素B12測定用培養(yǎng)基:見附錄A。

注:一些商品化合成培養(yǎng)基效果良好,商品化合成培養(yǎng)基按標(biāo)簽說明進(jìn)行配制。

4.4 9g/L氯化鈉溶液(生理鹽水)

稱取9.0g氯化鈉溶解于1000mL水中,分裝于具塞試管,每管10mL。121℃滅菌15min。

4.5 乙醇溶液:體積分?jǐn)?shù)為25%。

4.6 無水磷酸氫二鈉(Na2HPO4)。

4.7 無水偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)。

4.8 檸檬酸(含一個(gè)結(jié)晶水)(C6H8O7·H2O)。

4.9 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

4.9.1 維生素B12貯備液(10μg/mL):*稱取維生素B12標(biāo)準(zhǔn)品(4.2),用乙醇溶液(4.5)定容至維生素B12濃度為10μg/mL。

4.9.2 維生素B12中間液(100ng/mL):用乙醇溶液(4.5)將5.0mL維生素B12貯備液(4.9.1)定容至500mL。

4.9.3 維生素B12工作液(1ng/mL):用乙醇溶液(4.5)將5.0mL維生素B12中間液(4.9.2)定容至500mL

4.9.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液:分別吸取兩個(gè)5mL維生素B12工作液(4.9.3)于250mL和500mL容量瓶中,用水定容至刻度。高濃度溶液的濃度為0.02ng/mL;低濃度溶液的濃度為0.01ng/mL。

注:所有標(biāo)準(zhǔn)溶液要儲存于冰箱內(nèi)。4.9.1、4.9.2和4.9.3保存期三個(gè)月,4.9.4臨用前配制。

5.儀器和設(shè)備

除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下：

5.1 天平:感量為0.1mg。

5.2 pH計(jì):精度≤0.01。

5.3 分光光度計(jì)。

5.4 渦旋混合器。

5.5 離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥2000轉(zhuǎn)/分鐘。

5.6 恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃。

5.7 冰箱:2℃～5℃。

5.8 無菌吸管:10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器和吸頭。

5.9 瓶口分液器:0mL～10mL。

5.10 錐形瓶:200mL。

5.11 容量瓶(A類):100mL,250mL,500mL。

5.12 單刻度移液管(A類):容量5mL。

5.13 漏斗:直徑90mm。

5.14 定量濾紙:直徑90mm。

5.15 試管:18mm×180mm。

注:準(zhǔn)備玻璃儀器時(shí),使用活性劑對硬玻璃測定管及其他必要的玻璃器皿進(jìn)行清洗,清洗之后要求在200℃干熱2h。

6.分析步驟

6.1 測試菌液的制備

6.1.1 將萊士曼氏乳酸杄菌(ATCC 7830)的凍干菌株(4.1)活化后,接種到乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基(4.3.1)上,36℃±1℃培養(yǎng)24h。再轉(zhuǎn)種2代～3代來增強(qiáng)活力。置2℃～5℃冰箱保存?zhèn)溆?。?5d轉(zhuǎn)種一次。

6.1.2 將活化后的菌株接種到乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基(43.2)中,36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h,以2000轉(zhuǎn)/分鐘離心2min～3min,棄去上清液,加入10mL生理鹽水(4.4),混勻,再離心2min～3min,棄去上清液,再加入10mL生理鹽水(4.4),混勻。如前離心操作,棄去上清液。再加10mL生理鹽水(4.4),混勻。吸適量該菌懸液于10nL生理鹽水(4.4)中,混勻制成測試菌液。

6.1.3 用分光光度計(jì)(5.3),以生理鹽水(4.4)做空白,于550nm波長下測測試菌液(6.1.2)的透光率,使其透光率在60%～80%之間。

6.2 試樣的處理

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